产品目录

染料DiD,DiI,DiO和DiR是一类亲脂性荧光染料家族，用于标记细胞膜和疏水性组织。这是一类环境敏感型荧光染料，当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子(例如蛋白质，虽然在水中其荧光强度很弱)结合时，其荧光强度显著增强。它们具有很高的淬灭系数，偏光依赖性和很短的激发寿命。一旦应用于细胞中，这种染料会在细胞内质膜中逐步扩散，导致在其最佳浓度条件下，将整个细胞膜染色。它们不同的荧光颜色：DiI(橙色荧光)、DiO(绿色荧光)、DiD(红色荧光)、DiR(深红色荧光)，为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。

DiD(红色荧光)可以用来对活细胞进行成像和流式分析。DiD可以用633nm He–Ne激光器激发，有着比DiI更长的激发波长和发射波长，在细胞和组织染色中更有价值。

英文名称	DiD Perchlorate
光谱特性	Ex/Em=644nm/663nm
分子式	C61H99ClN2O4
分子量	959.91
结构式
纯度	＞95%
外观	红色或紫色或深蓝色固体
溶解性	溶于DMSO
储存条件	-20℃，避光防潮密闭干燥

• 染色液制备
  
  • 配置DMSO或EtOH储存液：储存液用DMSO或EtOH配置浓度1～5mM。
    注：未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。
    
  • 工作液制备：用合适的缓冲液(如：无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为1～5μM的工作液。
    注：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的10倍范围内开始最优浓度的摸索。
• 悬浮细胞染色
  
  • 加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。
    
  • 37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
    
  • 孵育结束，按1000～1500rpm离心5min。
    
  • 倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
    
  • 重复3、4步骤两次以上。
  
  
• 贴壁细胞的染色
  
  • 将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
    
  • 从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
    
  • 在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
    
  • 37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
    
  • 吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸干培养基。
  
  
• 显微镜检测
  DiD，DiO，DiI，DiR滤光器的选择参见表1。DiD染色可见红色荧光。
  
• 流式细胞仪检测
  DiO、DiI、DiD、DiR染色的细胞可以分别用经典的FL1，FL2，FL3和FL4流式细胞仪检测。